Armonización de Farmacopeas Eur & USP

Durante el año 2008, Merck Química Argentina tuvo el privilegio de dictar un Seminario sobre Armonización de Farmacopeas en la Asociación Argentina de Bioquímicos y Farmacéuticos. Dicho seminario tuvo una excelente convocatoria y parte de la información brindada es la que nos gustaría compartir en esta oportunidad con ustedes.

Previo a entrar en detalle en el tema del estado de la armonización, me gustaría dar un breve panorama sobre la importancia para los laboratorios de microbiología, de la norma ISO 11133 parte 1 y 2. Los motivos por los cuales se desarrolló esta norma fueron en primer lugar, porque no existía una norma internacional en la  cual se describieran las especificaciones del control de calidad (QC) de los medios de  cultivo comerciales; en segundo lugar, porque cada productor de medios de cultivo había establecido sus propias especificaciones de QC; y en tercer lugar, porque los usuarios de medios de cultivo no tenían información  acerca de los límites de crecimiento que son utilizados  por el fabricante de medios de cultivo.

Como los medios de cultivo deben cumplir con  los criterios de rendimiento mínimo o establecido, se deberían realizar demasiados testeos para demostrar:

- Aceptabilidad de cada lote de medio de cultivo

- Que el medio de cultivo sea apropiado para su fin

- Que el medio de cultivo pueda producir resultados coherentes y repetibles

Estos criterios son parte esencial de los procedimientos del control de calidad interno, el cual involucra:

• Crecimiento

- cuantitativo

- semi cuantitativo

- método cualitativo

• Productividad
• Selectividad
• Características Bioquímicas (especificidad)
• Evaluación del rendimiento e interpretación de resultados

Pero en lo referente a los métodos para medios de cultivo sólido de referencia, el cambio más importante es el referido a la productividad, pues esta deberá ser:

> 70% para medios no selectivos

> 50% para medios selectivos

Generalmente estos valores son alcanzables, sin embargo, pueden aceptarse criterios menos rigurosos para ciertas combinaciones de medios y microorganismos de testeo.

Todas las cepas de ensayo deben  tener > 70 % o > 50 % según el tipo de medio, de lo contrario el  lote se rechaza. Es muy importante que esto figure, sin excepción, en el certificado de análisis del medio de cultivo.

En lo referente a la documentación de los resultados del ensayo:

• El fabricante o proveedor proveerá, a pedido, un certificado de control de calidad con las características microbiológicas específicas e información general relacionada al lote específico del medio de cultivo.
• Se recomienda el uso de hojas de control para documentar y evaluar los resultados del ensayo de rendimiento de rutina.

Ahora sí, entrando de lleno al Estado de la Armonización de las farmacopeas, cabe aclarar que el  objetivo de la Armonización es el de contar con iguales métodos y especificaciones en la EP, USP y JP que conduzcan a:

• Igual calidad de las preparaciones y métodos de ensayo
• Fácil exportación (ej.: desde países bajo EP a países bajo USP, y viceversa) sin retesteo de productos o materias primas.

En el siguiente gráfico podremos visualizar cuales son los capítulos afectados referidos a los controles microbiológicos:

Refiriéndonos a la Implementación para aquellos laboratorios que vienen trabajando con la Farmacopea Europea

• El segundo grupo de ensayos (método armonizado "B") se convertirá en el método de referencia desde el 1 de enero 2009, i.e. cuando las monografías en cuestión hayan sido revisadas según los métodos armonizados.

• Para nuevas aplicaciones, respecto a la autorización de la comercialización de productos no cubiertos por una monografía, ambos grupos de ensayos se pueden utilizar hasta el 31 de Diciembre del 2008, sin embargo, el uso del segundo grupo es altamente recomendado. Desde el 1 de Enero del 2009, el segundo grupo de ensayos es para ser usado como método de referencia.

• Para productos ya autorizados no cubiertos por una monografía, pueden ser usados cualquiera de los grupos de ensayos hasta el 31 de Diciembre 2008. Desde el 1 enero 2009, el segundo grupo de ensayos es para ser usado como método de referencia.

Fuente: http://www.emea.europa.eu/Inspections/QWPfaq.html

Para los laboratorios que trabajan con la United States Pharmacopeia, la implementación de los siguientes capítulos de microbiología general de la USP-NF previsto para el 1 de agosto del 2007 ha sido postergado hasta el 1 de Mayo del 2009:

* <61> Microbiological Examination of Nonsterile Products: Microbial Enumeration Tests

* <62> Microbiological Examination of Nonsterile Products: Tests for Specified Microorganisms

* <1111> Microbiological Examination of Nonsterile Products: Acceptance Criteria for Pharmaceutical Preparations and Substances For Pharmaceutical Use

Los capítulos generales actuales de la USP-NF <61> Microbial Limit Tests y <1111> Microbiological Attributes of Nonsterile Pharmaceutical Products son válidos hasta el 1 de Mayo del 2009.

La fecha de implementación de los capítulos generales armonizados pospuestos

antes de Mayo 2009, es a discreción del usuario y puede ser sujeto a consideraciones

regulatorias.

Fuente: http://www.usp.org/USPNF/notices/postponementHarmonMicrobiology.html

Respecto a los ensayos para microorganismos específicos USP <62> & EP 2.6.13, debemos saber lo siguiente:

• 1) No hay ningún ensayo para microorganismos "objetables" (i.e. Bacillus cereus), los cuales de ahora en mas se llaman especificados.

"Fab Four" es ahora "Super Seven"

• 1) Diseñado para cumplir solo requisitos monográficos específicos
• 2) No se debería usar para determinar la calidad microbiológica de productos no estériles (más allá del ámbito de este capítulo), pues que no contenga ninguno de los 7 microorganismos listados no significa que sea microbiológicamente seguro (Ej.: puede tener Bacillus, xenotrophomonas, etc.)

En el siguiente cuadro podremos visualizar los Medios de cultivo que deberán a comenzar a utilizar y cuales deberán dejar de utilizar los laboratorios que trabajan hasta este momento bajo la USP:

En el siguiente cuadro podremos visualizar los Medios de cultivo que deberán a comenzar a utilizar y cuales deberán dejar de utilizar los laboratorios que trabajan hasta este momento bajo la EP:

Es importante saber que:

• Los medios recomendados y sus composiciones están publicados en el compendio.
• La composición de los medios es parte del ensayo oficial.
• Usted deberá corroborar si su proveedor de medios le provee medios con formulaciones iguales a ésta.
• No se necesita utilizar medios de origen no animal para estos ensayos.

Con los medios Armonizados debemos informar  ausencia de los siguientes microorganismos especificados:

• - Bacteria Bile-tolerant gram-negative (antiguamente Enterobacteriaceae)
• - Escherichia coli
• - Salmonella spp.
• - Pseudomonas aeruginosa
• - Staphylococcus aureus
• - Clostridium spp. (Antiguamente C. perfringens)
• - Candida albicans (Nuevo)

Para el caso de las bacterias gram-negativa bilis tolerante, el enriquecimiento se deberá realizar en el  Caldo de enriquecimiento para enterobacteriaceae (Mossel), el cual posee una composición nueva, incubando 24 - 48 horas a 30 - 35°C. La selección  deberá  realizarse en agar VRBD cuando anteriormente se realizaba en VRB incubando durante 18 - 24 h a 30 - 35 °C.

El Agar VRB armonizada sufrió los siguientes cambios en la composición:

• nueva fuente de peptona: gelatina
• nuevo pH: 7.4 +/- 0.2

Para la identificación de Escherichia coli, el enriquecimiento se debe realizar en Caldo Mac Conkey incubando 24 - 48 h a 42 - 44°C y la Selección en Agar Mac Conkey, Incubando 18 - 72 h a             30 - 35 °C

Cambios en la composición del Caldo Mac Conkey:

• nueva fuente de peptona: gelatina
• nuevo pH: 7.3 +/- 0.2

Cambios en la composición del Agar Mac Conkey

• Peptona de caseina por peptona de gelatina

Para la identificación de Salmonella spp. el enriquecimiento se debe realizar en  Caldo Rappaport-Vassiliadis Salmonella el cual posee una nueva composición, incubando 18 - 24 h a 30 - 35°C

(anteriormente se usaba el caldo tetrationato). La selección debe realizarse con agar xylosa Lisina Desoxycolato (XLD), también de composición nueva, incubando 18 - 24 h a 30 - 35 °C (anteriormente Agar XLD (ISO), Agar BPLS,  Agar Citrato Desoxycolato)

En lo referente a la identificación de Pseudomona aeruginosa, la Selección se debe seguir haciendo en agar cetrimide (Agar selectivo para pseudomona), incubando 18 - 72 h a 30 - 35°C

Cambios en la composición de agar cetrimide:

• Nuevo contenido de agar-agar: 13.6 g/l
• Nuevo pH: 7.2 +/- 0.2

Para la determinación de Staphylococcus aureus, la selección debe realizarse en agar manitol salado (antiguamente realizada en Agar Baird-Parker), incubando 18 - 72 h a 30 - 35°C

La determinación de Clostridium spp. se hace mediante la realización de un enriquecimiento en el Medio para clostridios (RCM), incubando 24 - 48 h a 30 - 35°C y la selección

en agar Columbia (con agregado de Gentamicina), incubando 18 - 72 h a 30 - 35°C

Cambios en la composición de Reinforced Clostridium Medium (RCM)

• Nueva cantidad de peptonas: 10.0 g/l

La determinación de Candida albicans es un ensayo nuevo y se lleva a cabo mediante un

Enriquecimiento en caldo sabouraud 2%-Dextrosa incubando 3 - 5 días a 30 - 35 °C    

La selección se debe realizar en agar sabouraud 4%-Dextrosa incubando 24 - 48 h a 30 - 35°C

Respecto al control de las propiedades nutritivas, indicativas y selectivas del medio de cultivo deshidratado, se debe considerar:

• Nuevas cepas de referencia
• Nuevo inoculo: no mayor a 100 cfu (10 - 100 cfu)
• Nuevo medio de dilución: Caldo NaCl-Peptone y Buffer Fosfato pH 7.2
• Nueva temperatura y periodo de incubación
• Nuevos límites en el recuento de colonias y en la tasa de recuperación (para ensayos de enumeración)

A continuación le mostraremos la disponibilidad de los medios de cultivo de Merck según el nuevo método armonizado de EP/USP/JP, con el nuevo criterio de ensayo interno y el  nuevo certificado de análisis (CoA)

Para validar sus productos con los nuevos métodos armonizados, se deberán realizar al menos 3 réplicas independientes, y cada una de ellas deberá demostrar que el número promedio de UFC recuperadas del producto en estudio o en validación (challenged) no es menor al 50% de las UFC recuperadas del inóculo control y que la recuperación es similar al control en los casos de microorganismo especificados (donde no hay recuento sino presencia / ausencia). O sea, los niveles del inóculo son menores de 100 UFC por microorganismos y la recuperación debe estar dentro de un factor de 2 (50%) del control (95% del límite de confianza para NMP).

Bioq. Mariano Veltri - Product Manager

Merck Química Argentina S. A. I. C.

E-mail: mveltri@merck.com.ar

Web Site: www.merck.com.ar